要在生物體外大量制作單株抗體，就必須先將專(zhuān)門(mén)分泌抗體的B細(xì)胞移殖到培養(yǎng)皿上，不幸的是，大部分的B細(xì)胞一離開(kāi)生物體就會(huì)死亡，無(wú)法在生物體外繁殖，連B細(xì)胞都養(yǎng)不活了，那能指望B細(xì)胞分泌抗體呢？后來(lái)科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，世界上只有一種細(xì)胞生命力強(qiáng)盛，不管移殖到那里都能活的好好的，那就是「癌細(xì)胞」，癌細(xì)胞是不正常且快速生長(zhǎng)的細(xì)胞，可以在培養(yǎng)基(一種含有養(yǎng)份的液體)中大量繁殖，如果將B細(xì)胞可以分泌抗體的特性與癌細(xì)胞生命力強(qiáng)盛的特性結(jié)合起來(lái)，就可以在培養(yǎng)皿上大量制作單株抗體了。

 

單株抗體的制作方法是先將B細(xì)胞與骨髓癌細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞，稱為「融合瘤」，如**圖16-7(a)所示，在融合的過(guò)程中B細(xì)胞與癌細(xì)胞的基因會(huì)重組，所以融合瘤含有B細(xì)胞與癌細(xì)胞基因重組后的染色體，同時(shí)具有B細(xì)胞與癌細(xì)胞的特性，可以分泌抗體，又可以在培養(yǎng)皿中大量繁殖。融合瘤的制作流程如下：

＞PEG細(xì)胞融合

將抗原(病毒)注入小白鼠體內(nèi)，再取出脾臟(含有大量的B細(xì)胞)，并且將脾臟細(xì)胞與癌細(xì)胞混合，加入PEG試劑進(jìn)行細(xì)胞融合，PEG試劑是一種化學(xué)藥品，會(huì)將B細(xì)胞與癌細(xì)胞的細(xì)胞膜分解，讓B細(xì)胞與癌細(xì)胞結(jié)合成一個(gè)融合瘤。

＞HAT篩選(Hypoxanthine、Aminopterine、Thymidine) 

將融合瘤以HAT培養(yǎng)基(一種含有化學(xué)藥品的液體)來(lái)培養(yǎng)，由于B細(xì)胞不容易在生物體外生長(zhǎng)，因此會(huì)自然死亡；癌細(xì)胞雖然很容易在生物體外生長(zhǎng)，但是會(huì)被HAT培養(yǎng)基殺死；最后只有B細(xì)胞與癌細(xì)胞結(jié)合形成的融合瘤存活下來(lái)，如圖16-7(b)與(c)所示。

＞ELISA篩選(Enzyme Linked Immunosorbent Assay) 

并非所有的B細(xì)胞都會(huì)產(chǎn)生我們所要的抗體，小白鼠原先就存在許多B細(xì)胞分泌抗體對(duì)抗其他疾病，因此必須使用酵素免疫分析法(ELISA)篩選出我們所要的抗體。

＞融合瘤單株化

接著將融合瘤，先稀釋分配到96個(gè)培養(yǎng)皿中，再以酵素免疫分析法(ELISA)篩選而得到「單株的融合瘤」。

＞產(chǎn)生抗體

將單株的融合瘤注入小白鼠腹部，再取出腹水，腹水內(nèi)就會(huì)含有大量的「單株抗體」。