本文標(biāo)題："電子和光學(xué)顯微學(xué)觀察樣品的象中得到襯度的變化"
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電子和光學(xué)顯微學(xué)觀察樣品的象中得到襯度的變化
在電子和光學(xué)顯微學(xué)中，在精確聚焦下襯度不足的原因是相
同的一一這些薄樣品(‘相位物體’)僅影響透過樣品的波的相位，
而不影響它的振幅。這樣，其作用象一種折射率可變的介質(zhì)
如果我們想要‘看見’例如在電鏡中的原子，就必須把這
只有使用相干照明和一個有‘缺陷’顯微鏡時，我們才有希望
從一個只有折射率變化的樣品的象中得到襯度的變化。在薄樣品
的高分辨電子顯微學(xué)中精確控制照明的相千性(illumination
coherence)和離焦量(defect of foous)，乃是成功之關(guān)鍵。隨照
明相干性的改進(jìn)，高分辨率顯微象中精細(xì)的細(xì)節(jié)量會有顯著的增加，
而在聚焦設(shè)置不當(dāng)情況下拍攝照片，也可能會觀察到完全謬誤的
細(xì)節(jié)。
為了說明在高分辨率時，相干性對成象質(zhì)量的影響
出了在其它條件相同，而照明相干性大為不同的各種條件下無定
形碳膜的象。在‘非相干’圖象中精細(xì)細(xì)節(jié)的丟失是明顯的。實際
上，在裝有常規(guī)的發(fā)叉形燈絲的電鏡中，照明相干性是由第二聚光
鏡光闌尺寸所決定的，這是一個產(chǎn)生高相干性的小孔徑。對足夠
小的電子源(如場發(fā)射、點狀陰極或LaBo源)照明可能是完全相
干的，而與第二聚光鏡(照明)孔徑的選擇無關(guān)。對這些電子源來
說，兩個聚光鏡縮小比率的設(shè)置對決定樣品處相干性程度也是重
需要著重強調(diào)的主要變化在于：在常規(guī)成象時，我們涉及的是厚樣
品，可能是染色樣品，用一個小的物鏡孔徑和大的聚光鏡光闌來成
象，聚焦不存在特殊問題。而在高分辨率相位襯度成象時，涉及的
是盡可能薄的(不染色的)樣品，用一個最佳尺度的較大物鏡光闌和
一個小的照明光闌。聚焦的選擇變得很苛刻，或者以計算所得的象
憑經(jīng)驗加以指導(dǎo)，或者以樣品所要結(jié)構(gòu)的鄰近有已知結(jié)構(gòu)小區(qū)域的
出現(xiàn)憑經(jīng)驗加以指導(dǎo)。對大多數(shù)不小于0．85nm分辨率所成象的大
單胞晶體來說，為了能給出一個容易解釋而不包括虛假細(xì)節(jié)的象，
當(dāng)顯微鏡的球差系數(shù)為1—2mm吼聚焦應(yīng)選擇在欠焦(減弱透鏡)60--
90nm的范圍內(nèi)。為了設(shè)置這樣的聚焦條件，必須校準(zhǔn)聚焦控制鈕。
在8。土節(jié)中給出了測量焦距級差(thefoousinorements)的各種方
法。
高分辨率工作對儀器的要求和變動
電子顯微鏡的主要制造廠家所提供的儀器性能都是十分接近的
。所有儀器都能給出點分辨率優(yōu)于0．35nm的明場象。現(xiàn)在傾向于
在高分辨率工作中用旁插式同心傾角臺，這種樣品臺生物工作者已
用了多年，而對于高分辨率的工作，這種臺會使對小晶體的定向大
為方便，因為使用這種樣品臺，隨樣品傾斜產(chǎn)生的橫向位移將會最
小。但對需長時間曝光的暗場工作時，這類樣品臺的性能還有待于
評價。 因為過去使用這類樣品臺時，由于熱效應(yīng)而引起的漂移速
率比頂插式的樣品臺要大得多。
實驗室如果現(xiàn)在已經(jīng)購置了透射顯微鏡，并想用它開展高分辨
率研究工作，則應(yīng)考慮以下各點。
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