本文標(biāo)題："脂多糖類物質(zhì)細(xì)胞分析圖像顯微鏡"
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脂多糖類物質(zhì)細(xì)胞分析圖像顯微鏡
大量外源蛋白質(zhì)的生產(chǎn)可能觸發(fā)熱休克反應(yīng)。熱休克調(diào)節(jié)子的響應(yīng)
將增加蛋白水解活性。在一些情況下，胞內(nèi)蛋白水解活性導(dǎo)致產(chǎn)品
降解速率等于其生產(chǎn)速率。
更易發(fā)生的是：目標(biāo)蛋白形成包含體。雖然外源蛋白是包含體
中的主要成分，但通常包含體中也包含一些其他細(xì)胞物質(zhì)。包含體
中的蛋白質(zhì)發(fā)生了錯(cuò)誤折疊。錯(cuò)誤折疊的蛋白質(zhì)是沒有生物活性的
，也是毫無(wú)價(jià)值的。如果從培養(yǎng)液中回收包含體，包含體能被重新
溶解并恢復(fù)活性(價(jià)值)。如果重溶過(guò)程很簡(jiǎn)單，而且恢復(fù)率非常高
，則包含體的形成就是有利的。因?yàn)樗?jiǎn)化了回收和純化的起始步
驟。在重溶過(guò)程中，用幾種分析方法來(lái)檢查蛋白質(zhì)以確保沒有發(fā)生
化學(xué)修飾作用是很重要的。即使一個(gè)側(cè)鏈基團(tuán)中的輕微變化也會(huì)改
變產(chǎn)品的效用。
生產(chǎn)胞質(zhì)蛋白質(zhì)(即非分泌性蛋白)也會(huì)產(chǎn)生一些其他非常嚴(yán)重
的后果。大腸桿菌中的胞內(nèi)環(huán)境可能不利于二硫鍵的形成。在大腸
桿菌中，這些蛋白質(zhì)(外源的)的第一個(gè)氨基酸通常是甲硫氨酸，而
在這些蛋白質(zhì)的固有宿主細(xì)胞中，經(jīng)過(guò)正常的翻譯后加工，它們的
第一個(gè)甲硫氨酸被切掉。如果產(chǎn)物被保留在細(xì)胞內(nèi)，在回收時(shí)就必
須裂解(破碎)細(xì)胞。細(xì)胞裂解通常導(dǎo)致大腸桿菌中內(nèi)毒素(或熱原
質(zhì))的釋放。內(nèi)毒素是脂多糖類物質(zhì)(在外膜中)，它能導(dǎo)致不希望
發(fā)生的副作用(例如高燒)，并造成病人死亡。因此，產(chǎn)品純化就是
一個(gè)非常重要的考慮因素。
可通過(guò)蛋白質(zhì)分泌和排泄(secretion and excretion)來(lái)避免
大腸桿菌的上述許多限制。在這里分泌被定義為蛋白質(zhì)穿過(guò)大腸桿
菌內(nèi)膜(到達(dá)細(xì)胞周質(zhì))的運(yùn)輸過(guò)程。排泄被定義為蛋白質(zhì)(從細(xì)胞
周質(zhì))釋放到胞外的過(guò)程。
大腸桿菌中約有20％的總蛋白被運(yùn)輸穿過(guò)內(nèi)膜而進(jìn)入細(xì)胞周質(zhì)
空間，或者摻入外膜中。
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