本文標(biāo)題："食品樣品細胞特征比表型特征分析顯微鏡"
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食品樣品細胞特征比表型特征分析顯微鏡
遺傳檢測
前已述及的快速微生物檢測和鑒定方法是基于微生物遺傳特性
所產(chǎn)生的表型。這些表型受生長條件(如溫度、pH、營養(yǎng)、氧化還
原電位、環(huán)境和化學(xué)壓力、有毒物質(zhì)以及水分活度等)的影響。基
于表型的分析方法(甚至包括免疫學(xué)檢測)都依賴于微生物細胞產(chǎn)生
能被抗體識別的抗原或能被抗原識別的抗體。診斷微生物學(xué)中傳統(tǒng)
的“金標(biāo)法”依靠表型的表達或變異所產(chǎn)生的特征來檢測。
細胞的遺傳特征比表型特征穩(wěn)定得多。細菌的自發(fā)突變頻率約
為一億分之一。因此近年來遺傳檢測技術(shù)有所發(fā)展，成為診斷微生
物學(xué)中的確證環(huán)節(jié)。關(guān)于這方面的爭論還在繼續(xù)，監(jiān)管微生物檢測
的政府部門和法規(guī)制定機構(gòu)之間還沒有作出統(tǒng)一的決策。本節(jié)主要
討論基于遺傳檢測技術(shù)的診斷和鑒定系統(tǒng)。
遺傳檢測的第一個階段是采用已知的DNA探針與未知細菌的DNA
序列進行雜交。Genetrak系統(tǒng)(Fμmingham, MA)提供了一種靈敏便
捷的方法來檢測食品中諸如沙門菌、李斯特菌、彎曲桿菌和大腸桿
菌0157等病原菌。最初，該系統(tǒng)采用標(biāo)記在DNA探針上的放射性同
位素來檢測未知培養(yǎng)物中的互補DNA。此類第一代探針的缺點有:①
大多數(shù)食品實驗室不希望在常規(guī)分析中使用放射性物質(zhì);②一個細
胞內(nèi)的DNA拷貝數(shù)有限。第二代探針利用酶反應(yīng)來檢測病原菌，并
以RNA作為靶分子。一個細胞內(nèi)僅有一個完整的DNA拷貝，然而核糖
體RNA的拷貝數(shù)可能有1000一10000個。因此，新一代的探針采用顏
色反應(yīng)來檢測目標(biāo)RNA。對食品樣品中的細菌(如沙門菌)進行約18h
的富集后，用去污劑將細胞(目標(biāo)細胞以及其他微生物)溶解以便胞
內(nèi)物質(zhì)(DNA, RNA及其他分子)釋放到溶液中。
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